Une variété de personnages jouables sont disponibles, certains avec des attributs uniques qui affectent le gameplay et la physique de la plate-forme. Les joueurs plus jeunes et moins expérimentés adoreront jouer en tant que Toadette, qui est tout nouveau dans les deux jeux, et Nabbit, qui n'était auparavant jouable que dans New Super Luigi U. Les deux personnages offrent une assistance supplémentaire pendant le jeu.
